光散射與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用于白細(xì)胞分類計數(shù)：聯(lián)合應(yīng)用激光射的過氧化物酶染色技術(shù)來進(jìn)行白細(xì)胞分類計數(shù)。嗜酸性粒細(xì)胞有很強(qiáng)的過氧化物酶活性，中性粒細(xì)胞有較強(qiáng)的過氧化物酶活性，單細(xì)胞資助之，而淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞均無此酶。

將血興高采烈經(jīng)過氧化物酶染色后，胞質(zhì)內(nèi)即可出現(xiàn)不同的酶化學(xué)反應(yīng)，由此構(gòu)成了此種血液分析儀的分析基礎(chǔ)，化妝品的分血器將血加入到含有清洗劑和甲醛的高滲液體內(nèi)（21倍稀釋）并孵育（400～700）20秒鐘。其中清洗劑（含有非離子表面活性劑）使細(xì)胞破壞，甲醛使白細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶被固定，此后發(fā)生第二步反應(yīng)，即加入過氧化氫和4氯=蔡酚，并加熱13秒，此時如果待測細(xì)胞質(zhì)中含有過氧化酶即可分解H2O2產(chǎn)生[O]，后者可使4氯-蔡酚顯色并沉積定位于酶反應(yīng)部位，此類細(xì)胞通過測試區(qū)時，由于酶反應(yīng)強(qiáng)度不同（陰性、弱陽性、強(qiáng)陽性）和細(xì)胞體大小不同，激光束射互細(xì)胞上的前向角和散射角有所不同，以X軸為吸光率標(biāo)記（酶反應(yīng)強(qiáng)度），Y軸為光散射（細(xì)胞大?。?。每個細(xì)胞產(chǎn)生的兩個信號結(jié)合定位在細(xì)胞圖上（圖2-18）。每秒鐘儀器可測上千個細(xì)胞。計算機(jī)系統(tǒng)對存儲的資料進(jìn)行分析處理，并結(jié)合嗜好堿性粒細(xì)胞或分葉核粒細(xì)胞通道結(jié)果計算出白細(xì)胞總參數(shù)和分類良數(shù)。

圖2-18 激光與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測白細(xì)胞直方示意圖

4．多角度偏振光散射白細(xì)胞分類技術(shù)（multi — Angle polatised scatter separation of white cell,MAPSS）其原理是一定體積的全血標(biāo)本用鞘流液按適當(dāng)比例稀釋。其白細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài)，因嗜堿性粒細(xì)胞嘌粒具有吸濕的特性，所以嗜堿性粒細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)部的滲透透壓高于鞘興高采烈的滲透壓而發(fā)生改變，紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白從細(xì)胞內(nèi)游離出來，而鞘液內(nèi)的水分進(jìn)入紅細(xì)胞中，細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)仍然完整，但此時的紅細(xì)胞折炮指數(shù)與鞘液的相同，故紅細(xì)胞不干擾白細(xì)胞檢測。

在水動力系統(tǒng)的作用下，樣本被集中為一個直徑為30μm的小股液流，該液流將稀釋細(xì)胞單個排列，因是單個通過激光束，故在各個方向都有其散射光。可以從四個角度測定散射光的密度（見圖2-19）：①00：前角光散射（10～30）粗略地測定細(xì)胞大??；②100：狹角光散射（70～110）測細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其復(fù)雜性的相對特征；③900：900消偏振光散射（700`～1100），基于顆粒可以將垂直角度的偏振激光消偏振的特性，將嗜酸細(xì)胞從中性粒細(xì)胞和其它細(xì)胞中分離出來。④900：垂直光散射（700～1100）主要對細(xì)胞內(nèi)部顆粒和細(xì)胞成分進(jìn)行測量。可以從這四個角度同時對個白細(xì)胞進(jìn)行測量，同一種特定的程序自動儲存和分析數(shù)據(jù)，將白細(xì)胞分為嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞5種。

圖2-19 MAPSS測量原理